Estudo do receptor do fator estimulador de colônia de macrófagos na diferenciação de monócitos e sua caracterização em células de linfomas difusos de grandes células B - Faccion, Roberta Soares (UFRJ, 2013)
[PT] O fator estimulador de colônia de macrófago (M-CSF) pode ser secretado por tumores, induzindo monócitos do sangue periférico a se diferenciar em macrófagos com um fenótipo imunotolerante e pró-tumoral (do inglês tumor-associated macrophages ou TAMs). Além disso, as células do próprio tumor podem se beneficiar da sinalização desencadeada pelo MCSF quando expressam seu receptor, constituindo um mecanismo de feedback positivo favorável ao crescimento tumoral e à formação de metástases. Por isso, estima-se que a inibição do receptor do M-CSF (M-CSFR) possa ser de interesse terapêutico para pacientes com tumores de modo à sensibilizar seu sistema imune ao tumor e a célula tumoral ao tratamento clínico. Além disso, a literatura indica que a via de sinalização ativada pelo MCSF possa estar acionada em linfomas difusos de grandes células B (LDGCB), mas a expressão do M-CSFR ainda não foi confirmada nestas células. O objetivo do presente estudo foi analisar a ativação do M-CSFR em monócitos normais e verificar a expressão do M-CSFR em células de linhagens celulares derivadas de LDGCB. Para isso, monócitos humanos foram purificados a partir de células do sangue periférico e estimulados com M-CSF. Devido às suas importantes diferenças funcionais, monócitos CD16+ e CD16- foram analisados separadamente. Inicialmente, foi observado que a diferenciação induzida pelo M-CSF de monócitos CD16+ é mais lenta do que a de monócitos CD16-, tanto em termos de expressão de marcadores de superfície, quanto em termos de atividade de caspases. Em seguida, foi observado que monócitos CD16+ apresentam o M-CSFR ativo mesmo na ausência do ligante – em termos de localização celular, fosforilação e ativação de vias de sinalização ativadas pelo M-CSF – enquanto monócitos CD16- somente apresentam atividade do M-CSFR mediante a exposição ao M-CSF.Nas linhagens celulares derivadas de LDGCB, não foi possível detectar a presença do M-CSFR na superfície destas células, embora o M-CSFR esteja expresso e apresente o mesmo peso molecular que nos monócitos. Estes dados sugerem que a regulação negativa da sinalização desencadeada pelo M-CSF em monócitos poderia levar a uma redução do fenótipo TAM e consequente sensibilização do tumor ao tratamento clínico e ao próprio sistema imune do paciente. Além disso, as características particulares do M-CSFR nas células de LDGCB poderiam ser exploradas em terapias anti-tumorais.[EN] The macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) can be secreted by tumors, inducing peripheral blood monocytes to differentiate into macrophages with an immunetolerant and pro-tumoral phenotype – tumor associated macrophages, or TAMs. In addition, tumor cells may themselves benefit from M-CSF induced cell signaling when they express the M-CSF receptor (M-CSFR), which constitutes a positive feedback mechanism favorable to tumor growth and metastasis formation. Hence, inhibition of the M-CSFR is thought to be of therapeutic interest for cancer patients so that their immune system would be more sensible to the tumor and the tumor cell to clinical treatment. Moreover, literature indicates that M-CSF-induced cell signaling may be activated in diffuse large B cell lymphomas (DLBCL), but M-CSFR expression has not been confirmed in these cells. Therefore, the objective of the present study was to analyze the M-CSFR activation in normal monocytes and to verify the M-CSFR expression in DLBCL-derived cells lines. For that, human monocytes were purified from peripheral blood mononuclear cells and stimulated in culture with the M-CSF. First, due to its important functional differences, CD16+ and CD16- monocytes were separately analyzed. It was observed that M-CSF-induced differentiation was delayed in CD16+ monocytes in relation to CD16- monocytes, in terms of surface markers expression and caspase activity. Next, it was observed that CD16+ monocytes display active M-CSFR even in absence of the ligand, in terms of cellular localization, phosphorylation and signaling pathways activation, while CD16- monocytes only display M-CSFR activity upon M-CSF exposure.In addition, GM-CSF treatment of CD16- monocytes is able to activate the M-CSFR, in terms of cellular localization, phosphorylation and signaling pathways activation, and it delays M-CSF induced differentiation, in terms of cellular surface markers and caspase activity, in a similar pattern to the observed in non-stimulated CD16+ monocytes. When it came to DLBCL-derived cells, it was not possible to detect the M-CSFR on the cellular surface of these cells, although it is expressed and presents the same molecular weight that in monocytes. These data suggest that the negative regulation of the M-CSF-induced signaling in monocytes could lead to a reduction in the generation of the TAM phenotype and resulting in the sensitization of the tumor to clinical treatment and to the patient’s own immune system. Furthermore, the particular features of the M-CSFR from LDGCB cells could be exploited in anti-tumor therapies.