Avaliação sistemática da influência de solventes de extração sobre o efeito de matriz na quantificação do Cloranfenicol em músculo de frango por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas Sequencial - Guimarães, Carlos Frederico Marques. (UFRJ, 2012)
[PT] O cloranfenicol (CAP) é um antibiótico bacteriostático utilizado tanto na terapêutica humana quanto na veterinária por apresentar um largo espectro de ação, porém, devido a seus efeitos genotóxicos e/ou citotóxicos, foi proibido para a utilização na terapêutica de animais produtores de alimentos (frango, camarão, peixes, suínos entre outros), o que não impede seu uso indevido. Nas últimas décadas, a técnica analítica da Cromatografia Líquida Acoplada à Espectrometria de Massas Sequencial (CLAE-EM/EM) tem sido bastante aplicada no monitoramento de resíduos e contaminantes em alimentos, já que é uma ferramenta analítica poderosa, devido às suas seletividade, sensibilidade e especificidade elevadas. Porém, o efeito de matriz (supressão iônica, SI, ou aumento iônico, AI), causado por endógenos interferentes da matriz complexa, afeta o desempenho quantitativo (precisão e exatidão) de métodos de análise por CLAE-EM/EM, pois a capacidade de detecção da técnica fica prejudicada. Por isso, o processo de extração e cleanup de amostras de matrizes complexas, bem como a pré-concentração dos analitos de interesse, devem ser bastante rigorosos para eliminar tais interferentes sem prejudicar a recuperação dos compostos monitorados. Usualmente, a adição de padrão interno isotopicamente marcado do analito na amostra também ajuda a corrigir o ganho ou a perda de sinal do composto analisado causado por tal fenômeno. No presente trabalho, foi avaliada a influência de diversos solventes de extração sobre o efeito de matriz na quantificação do CAP em músculo de frango por CLAE-EM/EM, onde utilizou-se diferentes sistemas binários de solventes para a extração sólido-líquido do CAP da matriz cárnea , (solventes aquosos: água deionizada; tampão borato pH 6,0; e tampão fosfato pH 7,4;solventes orgânicos: acetato de etila, éter etílico e terc-butil-metil-éter (TBME)/Acetato de Etila (1:1 v/v). A mistura binária de solventes de extração que apresentou melhor resultado foi o sistema composto por tampão borato pH 6,0:(TBME/Acetato de Etila (1:1 v/v), que forneceu recuperação de 93,7% para o CAP e supressão iônica de 6,3%. As condições instrumentais e o método para a análise do CAP em músculo de frango foram definidos e, em seguida, foi feita a validação a partir de critérios de desempenho estabelecidos na legislação brasileira para segurança alimentar. O método apresentou seletividade, linearidade (r > 0,99), na faixa de 0,15 g/kg a 0,60 g/kg, repetitividade entre 0,59 – 1,80%, para todos os níveis avaliados de concentração avaliados para o CAP, exatidão (recuperação aparente) de 88,58 – 101,39%, em todos os níveis de concentração avaliados na validação do CAP, limite de decisão (CC = 0,030 g/kg) e capacidade de detecção (CC = 0,037 g/kg).[EN] Chloramphenicol (CAP) is a bacteriostatic antibiotic used both in veterinary and in human therapy by presenting a broad spectrum of action, however, due to its genotoxic and / or cytotoxic effects, it has been prohibited for use in the treatment of food-producing animals (chicken, shrimp, fish, pigs and others), which does not prevent its misuse. In recent decades, the analytical technique of Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry (LCMS/ MS) has been widely applied in monitoring residues and contaminants in food, since it is a powerful analytical tool due to its selectivity, sensitivity and high specificity. However, the matrix effect (ion suppression or enhancement), caused by interfering endogenous compounds of complex matrix, affects the quantitative performance (accuracy and precision) of LC-MS/MS methods, since capacity detection technique is impaired. Therefore, the process of extraction and cleanup of samples of complex matrices, as well as preconcentration of the analyte of interest must be accurate enough to eliminate these interfering compounds without affecting the recovery of residues monitored. Usually, the addition of internal standard isotopically labeled in the sample also helps to correct the increase or loss of signal caused by this phenomenon. In this study, was evaluated the influence of different extraction solvents on the matrix effect on quantification of CAP in chicken muscle by LC-MS/MS where was used differents binary solvent systems for solid-liquid extraction of the CAP from chicken muscle (aqueous solvent: deionized water, borate buffer pH 6.0 and phosphate buffer pH 7.4; organic solvents:ethyl acetate, ethyl ether and tert-butyl methyl ether (TBME) / ethyl acetate (1:1, v/v). The binary mixture of solvent extraction that showed the best result was the system consisting of borate buffer pH 6.0 (TBME / ethyl acetate (1:1, v /v)), that provided a recovery of 93.7% for the CAP and ionic suppression of 6.3%. Instrumental conditions and the analytical method for CAP in chicken muscle were established and the analytical method was validated according to Brazilian Legislation for food safety. The method showed selectivity, linearity (r) > 0.99, over a range of 0.3-0.6 g/kg, repeatability of 0.59 to 1.80 %, accuracy (apparent recovery) from 88.58 to 101.39%, Decision Limit (CC) of 0.028 g/kg) and Detection Capability (CC) of 0.035 g/kg.