Efeito de anticorpos monoclonais da patobiologia de infecções por Pseudallescheria boydii e Histoplasma capsulatum : Livia Cristina Liporagi Lopes. - Lopes, Livia Cristina Liporagi (UFRJ, 2010)
[PT] Pseudallescheria boydii é um fungo pertencente ao complexo Pseudallescheria/Scedosporium. P. boydii é um fungo oportunista capaz de causar infecções similares, em termos de variedade e predisposição, àquelas infecções causadas por espécies de Aspergillus. Peptidoramnomananas (PRMs) são glicoconjugados presentes na parede celular de fungos, e sua presença e estrutura parcial já foram caracterizadas em P. boydii, Scedosporium prolificans e Sporothrix schenckii. Estudos anteriores relataram a antigenicidade desta molécula, bem como sua participação na interação com células animais. No presente estudo, 3 anticorpos monoclonais (IgG1) anti-PRM de P. boydii foram gerados e purificados, e seus efeitos na biologia e virulência de P. boydii foram testados em experimentos in vitro e in vivo. Os resultados demonstraram que os anticorpos monoclonais competem pelo mesmo epítopo na molécula de PRM, e que este epítopo corresponde à porção carboidrato da molécula. Os resultados in vitro mostraram que, na presença destes anticorpos, conídios de P. boydii germinaram mais e foram menos fagocitados por macrófagos J774.16. Os experimentos in vivo mostraram que os animais tratados com os anticorpos, previamente à infecção com o fungo, morreram mais que os animais controles, demonstrando que os anticorpos anti-PRM podem aumentar a doença fúngica nos camundongos, elevando assim os índices de letalidade. Assim, esta glicoproteína parece estar modulando funcões como germinação e virulência do fungo, além de interação com células hospedeiras. Neste contexto, torna-se de grandeimportância a elucidação dos mecanismos de patogênese e resistência fúngicas, e o entendimento sobre a composição e possíveis funções destes glicoconjugados, o que pode levar a um progresso substancial na prevenção e tratamento das infecções fúngicas.Histoplasma capsulatum var. capsulatum é um fungo dimórfico e cosmopolita, sendo um dos agentes etiológicos de micoses respiratórias mais prevalentes. A resposta na histoplasmose tem sido caracterizada nos últimos anos, mas a relevância destes anticorpos na patogênese fúngica ainda é desconhecido. Estudos recentes demonstraram a existência de anticorpos monoclonais protetores, não protetores e com capacidade de acentuar a doença. Neste trabalho, os possíveis efeitos do anticorpo monoclonal (H1C) contra uma proteína de 70 kDa de superfície celular de H. capsulatum foram testados em diferentes experimentos. Na presença deste anticorpo, foi observado um aumento na sobrevivência intracelular de leveduras de H. capsulatum em macrófagos J774.16. De forma semelhante, observou-se uma diminuição da liberação de óxido nítrico por estes fagócitos. Os estudos in vivo também demonstraram que o anticorpo não se mostrou hábil em proteger os animais após infecção letal por H. capsulatum. Estes resultados prévios apontam para um possível papel desta molécula na virulência do fungo e na interação com células do hospedeiro, o que revela a grande complexidade no que concerne às interações patógeno – célula hospedeira.[EN] Pseudallescheria boydii is part of the Pseudallescheria - Scedosporium complex. P. boydii is an opportunistic fungus that can cause a broad spectrum of diseases, very similar with infections of other fungi, as Aspergillus species. Peptidorhamnomannans (PRMs) are cell wall glycoconjugates present in some fungi, and their structures have been characterized in P. boydii, Scedosporium prolificans and Sporothrix schenckii. Previous works related the antigenic properties of this molecule as well as its participation in interaction process with animal cells. In the present study, three monoclonal antibodies (mAbs, IgG1) against PRM from P. boydii were generated and their effects on P. boydii biology and virlence were examined by in vitro and in vivo experiments. The mAbs recognized a very similar or overlapping epitope, which is formed by the carbohydrate moiety of the PRM. In culture, the addition of PRM mAbs increased the P. boydii conidia germination and reduced the conidial phagocytosis by J774.16 macrophages. In a murine infection model, mice treated with these antibodies against PRM died in a higher level than compared to the control animals, suggesting that anti-PRM antibodies can exarcebate the fungal disease enhancing the fungal lethality. Thus, PRM should be involved with fungal morphogenesis and virulence. Further insights into the effects of these glycoconjugates on the pathobiology of P. boydii may lead to new avenues for preventing and treating pseudallescheriosis, with a focus in the antifungal therapies.Histoplasma capsulatum var. capsulatum is a dimorphic fungus with worldwide distribution. This pathogen is one of the most important etiologic fungal agent of respiratory mycosis. Histoplasmosis has been studied in the last years, but the role of mAbs in the pathogenesis is still unclear. Recent work showed that mAbs can be protective, non-protective or enhancing-disease. This study showed that monoclonal antibody H1C against a 70 kDa cell surface antigen of H. capsulatum, in the highest concentrations, increased intracellular fungal growth and reduces macrophage nitric oxide release. This antibody was not able to protect mice against experimental histoplasmosis. These previous results indicate that this 70 kDa protein can be evolved in the virulence of H. capsulatum and the interaction of this fungus with the host cells, demonstrating the complexities of host-pathogen interactions.