Efeito do licopeno e do ácido acetil salicílico na proliferação e indução de apoptose em células de organóides de próstata humana - Cerqueira, João Batista de (UFRJ, 2008)
[PT] O efeito do licopeno e do ácido acetil salicílico na proliferação e indução de apoptose em células de organóides de próstata humana foi estudado através de cultura aderente e um novo modelo de cultivo tridimensional de organóides de neoplasias prostáticas humanas. No período de 120, dias foram coletadas espécimes de seis pacientes, quatro, com diagnóstico de obstrução infra-vesical secundária a HPB, submetidos à prostatectomia, e dois, com diagnóstico de CaP, estádio T1c, Gleason 3+3, submetidos à prostatectomia radical. De cada peça cirúrgica, após corte frontal, foi coletado um espécime com 0,5 cm de espessura que foi processado na capela com fluxo laminar e submetido à digestão enzimática para obtenção de células e organóides prostáticos. A avaliação da proliferação foi realizada através de cultura aderente plaqueando-se 20 poços com 2,0 x 104 células. A curva de sobrevivência foi estabelecida com contagem das células incubadas com AAS, licopeno e controles, na câmara Neubauer, nos dias T0, T2, T5, T8 e T12. A apoptose das células epiteliais de organóides prostáticos em cultivo foram marcadas pelo método TUNEL e avaliadas, comparando-se a incidência no momento do plaqueamento dos organóides com a incidência após 48 horas de incubação com AAS, licopeno e controles. Houve proliferação das células prostáticas incubadas em cultura aderente com AAS, licopeno e controles, permitindo fazer a curva de sobrevivência. A incidência de apoptose foi de 3,89% em 1590 células epiteliais de 20 ácinos oriundos de organóides incubados com AAS, 3,82% de 1567 células epiteliais de 20 ácinos incubados com licopeno e de 2,81% de 1639 células epiteliais de 20 ácinos incubados somente com DMEM. O estudo demonstrou a viabilidade do modelo de cultivo tridimensional com organóides prostáticos que possibilita, in vitro, estudos farmacológicos emcélulas de tecidos hiperplásicos e neoplásico de próstata humana. O modelo preserva, nos organóides, a cito-arquitetura do tecido prostático, possibilitando estudos morfológicos comparativos. Foram observadas diferenças quantitativas com menores índices de proliferação das células de hiperplasias e neoplasias prostáticas incubadas com ácido acetil salicílico e licopeno em comparação com os controles. Houve aumento de apoptose nas células epiteliais de ácinos de organóides, de hiperplasias e neoplasias prostáticas, de 26,4% quando incubadas com licopeno e, 27,8%, quando incubadas com ácido acetil salicílico.[EN] The effect of lycopene and aspirin in the proliferation and apoptosis induction in cells of organoids of human prostate was studied through adherent culture and a new model of three-dimensional cultivation of organoids of neoplasic human prostatic. At the period of 120 days, specimens from six patient were collected, four with diagnosis of obstruction secondary BPH, submitted to prostatectomy, and two with diagnosis of prostate cancer, stage T1c, Gleason 3+3, submitted to radical prostatectomy. From each surgical piece, after front cut, a specimen was collected with 0.5 cm thickness and was processed under the laminar flow hood and submitted to enzymatic digestion, for obtaining cells and prostatic organoids. The evaluation of the proliferation was realized through adherent culture, plating 20 wells with 2.0 x 104 cells. The survival curve was established counting the cells incubated with aspirin, lycopene and controls, on the camera Neubauer, at the days T0, T2, T5, T8 and T12. Apoptosis of the epithelial cells from prostatic organoids in cultivatur were labeled by the TUNEL method and quantified comparing the incidence at the moment of the plating of organoids with the incidence after 48 hours of incubation with aspirin, lycopene and controls. There was proliferation of the prostatic cells incubated in adherent culture with aspirin, lycopene and controls, allowing the survival curve. The apoptosis incidence was 3,89% of 1590 epithelial cells from 20 acini originating from the organoids incubated with aspirin, 3,82% of 1567 epithelial cells from 20 acini incubated with lycopene and 2,81% of 1639 epithelial cells from 20 acini only incubated with DMEM. The study demonstrated the viability of the three-dimensional model cultivation with prostatic organoids that makes possible, in vitro, pharmacologist studies in cells from hyperplastic and neoplasic tissue of human prostate.The model preserves in the organoids, the architecture of the prostatic tissue, making possible comparative morphologic studies. Quantitative differences were observed with smaller levels of proliferation of the hyperplasia and neoplasic prostatic cells incubated with aspirin and lycopene in comparison as the controls. There was increase of the apoptosis in the epithelial cells from acini of hyperplasia neoplasic prostatic organóides, 26.4%, when incubated with lycopene, and 27.8%, when incubated with aspirin.