Efeito de lisofosfatidilcolina na diferenciação e sinalização celular de Herpetomonas samuelpessoai - Dutra, Fernando Lourenço (Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2008)
[PT] Herpetomonas samuelpessoai é um tripanossomatídeo parasita do inseto Zelus leucogramus. Durante seu ciclo de vida, este protozoário apresenta três formas evolutivas: promastigota, paramastigota e opistomastigota. O fator de ativação de plaquetas (PAF) é um fosfolipídeo mediador de muitos processos biológicos e patofisiológicos, incluindo diferenciação celular, inflamação e alergia. Recentemente foi demonstrado que PAF estimula a diferenciação celular de Herpetomonas muscarum muscarum e Trypanosoma cruzi. A lisofosfatidilcolina (LPC) é o mais importante componente bioativo de lipoproteínas plasmáticas, como o LDL. Esta molécula está envolvida em doenças inflamatórias e arteriosclerose, sendo produzida em condições fisiológicas e patológicas. Em estudos anteriores, foi demonstrado que a LPC está presente na saliva de Rhodnius prolixus, agindo como uma molécula anti-hemostática. Fosfolipases A2 (PLA2) são enzimas que especificamente catalisam a hidrólise de ligações 2-éster de 3-sn-fosfoglicerídeos. A PLA2 cliva a fosfatidilcolina em lisofosfatidilcolina. Neste trabalho tivemos o intuito de verificar se LPC e fosfatidilcolina (PC) são capazes de induzir diferenciação celular de H. samuelpessoai e se ocorre influência da PLA2 em clivar a PC em LPC e esta exercer sua atividade na diferenciação celular mediante as vias de sinalização conhecidas.Também tivemos como objetivo verificar um possível envolvimento do receptor de PAF no processo. Para isso, os parasitos foram crescidos por 96 horas, no meio complexo Roitman, na ausência ou presença dos seguintes moduladores lipídicos: PC , LPC (como controle positivo), o antagonista do receptor de PAF, WEB2086, os inibidores de CK2, TBB e DRB. A porcentagem de formas não diferenciadas (promastigota) e formas diferenciadas (paramastigota e opistomastigota) foi determinada diariamente através de preparações coradas por Giemsa. Os melhores resultados foram obtidos após 48 horas de crescimento. LPC foi capaz de intensificar o aumento de diferenciação, que foi prontamente revertido por TBB e DRB. Estes resultados demonstram que parece haver o envolvimento do receptor de PAF no processo de diferenciação celular de Herpetomonas samuelpessoai mediada pelo fosfolipídio lisofosfatidilcolina, envolvendo a proteína CK2.[EN] Herpetomonas samuelpessoai is a trypanosomatid parasite of the insect Zelus leucogramus. Lysophosphatidylcholine (LPC) is a major bioactive compound of plasmatic lipoproteins like LDL. The presence of LPC in the saliva of Rhodnius prolixus and its anti-hemostatic activities have been demonstrated. Plateletactivating factor (PAF) is a phospholipid with potent and diverse physiological and pathophysiological actions. PAF is known as a powerful inducer of cell differentiation in Herpetomonas muscarum muscarum and Trypanosoma cruzi. The enzyme phospholipase A2 (PLA2) catalyzes the hydrolysis of the 2-ester bond of 3-sn-phosphoglyceride, transforming phosphatidylcholine (PC) into LPC. We have shown that LPC modulates some signaling pathways that lead to cell differentiation of H. samuelpessoai and that PLA2 probably rules this process by converting PC into LPC. Intriguingly some of LPC actions are dependent on PAF receptor. The present study intends to confirm the involvement of protein kinase CK2, as well as to test the possible participation of PAF receptor in this process. H. samuelpessoai parasites were grown for up to 96 hours in Roitman complex medium, in the absence or in the presence of PC, LPC, PAF receptor antagonist (WEB 2086), and CK2 inhibitors (DRB and TBB). The percentage of non-differentiated (promastigote) and differentiated forms (paramastigote and opisthomastigote) were daily determined by Giemsa stained preparations. The best results were obtained at 48 hours of growth: control (60% promastigotes, 40% differentiated); LPC (40% promastigotes, 60% differentiated); DRB + LPC (70% promastigotes, 30% differentiated); TBB + LPC (60% promastigotes, 40% differentiated); WEB + LPC (62% promastigotes, 38% differentiated). These results highly suggest the involvement of PAF receptor in cell differentiation of H. samuelpessoai triggered by LPC.