Desenvolvimento de meios de cultivo quimicamente definidos para a produção de fator VIII recombinante - Vareschini, Daniel Tait. (UFRJ, 2009)
[PT]O cultivo de células animais é um processo complexo, principalmente em vista dos requerimentos de nutrientes necessários para a homeostasia celular. O estresse celular causado pelo cultivo in vitro de células de origem tecidual desencadeia um desbalanço nas funções metabólicas vitais, o qual provoca o consumo excessivo de nutrientes, a excreção de metabólitos tóxicos e uma geração ineficiente de produtos. Os requerimentos de células animais por combinações complexas de nutrientes foram satisfeitos, por muitas décadas, principalmente através da utilização de soro fetal bovino. No entanto, este suplemento de origem animal gera problemas ao cultivo relacionados à variabilidade de lote para lote e segurança biológica, razões pelas quais vem sendo substituído por suplementos quimicamente definidos. Neste trabalho, foi utilizado um meio basal desenvolvido no Laboratório de Engenharia de Cultivos Celulares da COPPE/UFRJ (PFM-LECC12). O mesmo foi suplementado com nutrientes que foram avaliados através de planejamentos experimentais, para o cultivo de células BHK (baby hamster kidney) produtoras de fator VIII, visando atingir maiores níveis de produção da proteína de interesse. As células foram adaptadas ao cultivo em suspensão e a avaliação da produção de fator VIII foi feita utilizando frascos agitados do tipo spinner. Dentre os melhores meios testados, três meios químicamentes definidos se destacaram em comparação a meios comercialmente disponíveis.[EN]The culture of animal cells is a complex process. The cellular stress caused by in vitro culture of cells triggers an imbalance in vital metabolic functions. This imbalance leads to excessive consumption of nutrients, the excretion of toxic metabolites and an inefficient generation of products. The need of cells for complex and specific combinations of nutrients has been met for decades mainly by the use of fetal bovine serum. The addition of this animalderived supplement may cause problems related to batch-to-batch variability and biosafety issues, so that it is being replaced by chemically defined supplements. In the present work a basal medium (PFM-LECC12) developed at the Laboratório de Engenharia de Cultivos Celulares of COPPE/UFRJ, was supplemented with different nutrients that were evaluated through statistical experimental design, aiming to achieve higher production levels of recombinant human factor VIII. Recombinant BHK (baby hamster kidney) cells were adapted to suspension cultivation and assessment the experiments to evaluate the production of factor VIII were performed in spinner flasks. Among the best media tested, three chemically defined media are highlighted in comparison to commercially available media.