Manipulação do perfil de fosforilação de proteínas em mosquitos infectados com o parasito da malária - Telhado, Raquel Senna (UFRJ, 2007)
[PT] Neste trabalho, nós identificamos uma tirosina fosfatase (PT) em Aedes e essa atividade apresentou pH ótimo entre 3,5 -5,0 , linear com pNPP o,5 mM e 60 minutos de reação. Inibidores de tirosina fosfatases, vanadato, prevanadato e molibdato inibiram totalmente a atividade. Um sustrato específico para PTP inibiu a atividade em 50% na cabeça, tórax e abdômen e 95% no estômago. A massa molecular aparente determinada foi de 112kDa. A alimentação com sangue promoveu uma diminuição (66%) na atividade PTP do estômago, mas nos outros tecidos não foi alterada. A alimentação com sangue infectado promoveu um aumento na atividade da cabeça (132%) e no estômago (113%) quando comparadas com a alimentação com sangue não infectado. O perfil de fosforilação em tirosina foi modulado pelas alimentações com sangue e sangue infectado. A procura no genoma do Aedes por PTPs resultou em 36 sequências, entre elas a CB690741. Através de PCR em tempo real foi observado um aumento na expressão dessa enzima nos estômagos infectados. A PTP do estômago apresentou aumento na atividade no segundo dia após a eclosão. Mosquitos com dois após a eclosão e tratados com hormônio juvenil levou ao aumento na atividade (45%) PTP do estômago. A infecção com malária alterou o perfil de expressão de proteínas do estômago. Nós detectamos 28 spots, 10 estavam presentes apenas nas fêmeas alimentadas com sangue e 5 nas alimentadas com sangue infectado. Esses dados mostram pela primeira vez que o parasito da malária pode modular a PTP presente nos tecidos do mosquito e provavelmente mudar a sinalização intracelular do vetor. Dessa forma, o conhecimento detalhado desses mecanismos de sinalização pode ser utilizado para o desenvolvimento de novas estratégias para o combate da transmissão da malária.[EN] In this work, we identified a tyrosine phosphatase (PTP) in all tissues and this activity presented a optimum pH at 3.5 –5.0, linear with 0.5 mM pNPP up to 60 minutos of reaction. Tyrosine phosphatase inhibitors such as sodium vanadate, pervanadate and ammonium molybdate were capable to inhibit totally phosphatase activity. A specific substrate to PTP inhibited 50% the head, torax and abdomen activity and 95% in midgut. The apparent molecular mass deteremined for this enzyme was 112 kDa. Blood-feeding induced a decrease (66%) in midgut tyrosine phosphatase activity but did not affected the others tissues. Infected blood-feeding induced an increase in head (132%) and midgut (112%) tyrosine phosphatases activities when compared with non infected mosquitos. The phosphotyrosine profile was modulated by blood and infected-blood meals. A search on Aedes genome for PTP supplied 36 sequences, among them CB690741. By Real Time PCR an increase in this PTP expression was observed in infected midguts. The midgut PTP activity showed an increase two days after female emergence. Mosquitoes with two days after emergence were treated with juvenile hormone and an increase (45%) was obesrved on PTP activity. Malaria infection changed the protein expression in midgut. We detected 28 spots, 9 spots were detected only in bloodfeeding midguts and 5 spots in infected blood-feeding. These data show for the first time that malaria parasites can modulate the tyrosine phosphatase present in all mosquito tissues and probably changes the intracellular signaling in the vector. Detailed knowledge of these signaling mechanisms may be exploitable in the future towards developing novel strategies of blocking malaria transmission.