Ação proteolítica das proteases do veneno de bothrops jararaca sobe eus próprios constituintes e identificação de uma proteína de alta massa molecular da família das lectinas tipo C - Sousa, Jurema Rapôso Felix de (Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2003)
O veneno de Bothrops jararaca apresenta em sua constituição uma grande variedade de enzimas proteolíticas. Nesta tese, avaliamos a capacidade destas proteases atuarem sobre os demais constituintes do veneno e analisamos o reconhecimento antigênico, padrão de migração eletroforética e atividades biológicas descritas para o mesmo. O veneno foi ressuspenso em dois pHs 5,0 e 8,5. incubado à temperatura ambiente por 0, 24 e 48h. Não observamos variações significantes para as atividades azocaseinolítica e hemaglutinante em pH 5,0. Entretanto, neste pH vemos um aumento da atividade fosfolipásica A2 que é proporcional ao aumento do tempo de incubação e uma atividade procoagulante mais acentuada. A análise do padrão de migração das alíquotas revelou que em pH 5,0 não existem mudanças visuais significantes enquanto em pH 8,5 ocorre um desaparecimente gradual de bandas entre 45 e 66 KDa. Em pH 8,5, a taxa de hidrólise da azocaseína não sofreu alterações, mas a atividade hemaglutinante diminui cerca de 93% após 24 h de incubação. A adição de um coquetel de inibidores de proteases (EDTA, PMSF, PPACK e benzamidina) a mistura gera uma proteção eficaz contra a degradação observada em pH 8,5, assim como reduz as modificações observadas para a atividade fosfolipásica A2 e torna o reconhecimento antigênico das amostras semelhantes indenpendente do pH e do tempo de incubação. Concluimos, portanto, que a manipulação do veneno de Bothrops jararaca quer em pH 5,0 ou 8,5 pode produzir mudanças significantes em suas atividades biológicas. Várias proteínas têm sido purificadas de diversos venenos de serpentes pertencentes à família das lectinas tipo C. Estudos anteriores mostraram que proteínas de alto peso molecular do veneno bruto de serpentes brasileiras foram reconhecidas pelo anticorpo anti-BjC (Castro et al, 1999). Visando a purificação destas proteínas, 800 mgdo veneno bruto de Bothrops jararaca em uma coluna de gel filtração (Sephacryl S-200). As frações contendo proteínas de alto peso foram analisadas por Western e uma banda de 83 KDa foi reconhecida. O N-terminal, determinado pela degradação de Edman automatizado, apresentou alto grau de homologia (84%) com a cadeia b da flavocetin-A (Taniuchi e col., 1995).